怎樣確定PVDF轉印膜是否轉成功?
可以采用染色法來確定轉膜是否成功,PVDF轉印膜染料分2類,可逆染料在評估印跡之后可被從膜上洗掉。這些操作不干擾后續(xù)的免疫檢測或印跡上蛋白的其它分析。最常用的可逆蛋白染料是麗春紅??赡嫒玖系闹饕秉c在于它們的靈敏度不及不可逆染料。由于印跡上高豐度蛋白的染色模式通常也能很好地提示低豐度蛋白在多大程度上轉移,可逆染料靈敏度不高的缺點在大部分情況下并不影響使用。
不可逆染料通常表現(xiàn)出很優(yōu)的靈敏度,但會干擾或阻止蛋白的進一步分析。不可逆染料有氨基黑和考馬斯亮藍等。
圖: 小牛肝臟蛋白在電轉到Immobilon?-P轉印膜后的觀察:(A) 透照,(B) 考馬斯亮藍,(C) 麗春紅,(D) 氨基黑 和 (E) CPTS總蛋白染料。從左到右,每條泳道依次是分子量標準品和12.2 g、6.1 g、3.1 g裂解液。